Coloração de Gram como eu aprendi. :3

Coloração de Gram

A coloração de Gram é uma  coloração diferencial, através da qual as bactérias são classificadas em Gram-positivas ou Gram-negativas, dependendo da retenção ou não do corante cristal-violeta, esta reação é de grande importância para a sistemática bacteriana.

1.1. Reagentes

- Solução de cristal violeta, Solução de lugol (iodeto de potássio - KI), Solução de safranina, Solução álcool – acetona

1.2.  Material

- Suspensão bacteriana, lâminas, lamínulas, alça de inoculação, bico de Busen, pinças, microscópio, óleo de imersão, pipeta Pasteur.

1.3. Preparação do esfregaço bacteriano

a)    Limpar bem uma lâmina de vidro, (passar algodão embebido em álcool).

b)    Quando se tratar de uma cultura em meio líquido, com uma alça de inoculação, tomar uma pequena porção da cultura, observando as precauções de assepsia, e colocá-la sobre a lâmina espalhando-a para formar uma película bem fina.

c)    Quando for uma cultura em meio sólido, colocar uma gota de água destilada sobre a lâmina e com uma alça de inoculação, colher uma pequena quantidade de crescimento bacteriano da superfície do agar e suspendê-la na gota de água destilada, espalhando suficientemente para obter um esfregaço fino.

d)    Fixar o esfregaço, ao ar ou passando a lâmina três vezes sobre a chama.

e)    Deixar a lâmina esfriar.

1.4. Método de coloração de gram

a)    Cobrir a esfregaço seco e fixado com a solução de cristal violeta (corante básico), esperar um minuto.

b)    Remover o excesso da solução de cristal violeta da lâmina, lavando-a levemente com água corrente ou destilada.

c)    Cobrir o esfregaço com solução de lugol durante um minuto.

d)    Descorar o esfregaço usando uma solução de álcool – acetona (gotejar a solução até que não saia mais o corante, ou deixar sobre a lâmina por 30 segundos).

e)    Cobrir o esfregaço com solução de safranina, durante 30 segundos.

f)     Lavar levemente com água corrente.

g)    Esperar a lâmina secar naturalmente ao ar livre, ou enxugá-la delicadamente com papel filtro, através de leve compressão do mesmo sobre a lâmina.